酵母双杂交筛选与CVB33A相互作用的人心脏蛋白

• 作者: 何冰清 刘曦 张静怡 方舒 李秀珍 罗军 赵颖洁 黄孝天
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 酵母双杂交 CVB3 3A
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 146-149
• 页数: 4页
• 分类号: R373
• 字数: 3027字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.02.008

摘要

目的 以CVB3非结构蛋白3A为诱饵,从人心脏cDNA文库中筛选与其相互作用的宿主蛋白,对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定.方法 构建pGBKT7-3A重组质粒,Western Blot检测3A融合蛋白的表达;利用酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库,经PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等实验将阳性克隆归类,并通过测序、相似性比对分析和回返配合实验去除假阳性蛋白.结果 成功构建诱饵质粒pGBKT7-3A,Western Blot结果表明,pGBKT7-3A重组质粒在酵母菌中成功表达3A融合蛋白;经双杂交筛选和回返配合实验,获得了7个相互作用的蛋白,分别为:兰尼碱受体2(Ryanodine Receptor 2,RyR2),信号肽酶 2(Signal peptidase complex subunit 2,SPCS2),跨膜蛋白emp24(Transmembrane emp24 protein transport domain containing 4,TMED4),细胞色素c氧化酶亚基I(Cytochrome c oxidase subunit I,COX1),细胞色素c氧化酶亚基III(Cytochrome c oxidase subunit III,COX3),肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MYH7)和琥珀酸脱氢酶亚基D(Succinate dehydrogenase complex subunit D,SDHD).结论 应用酵母双杂交技术,以CVB3 3A为诱饵蛋白,从人心脏cDNA文库中获得7种不同的阳性基因:RyR2 、SPCS2 、TMED4、COX1、COX3、MYH7和 SDHD,在分子水平上探索3A蛋白的新功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗军	南昌大学医学院微生物学教研室	42	283	9.0	15.0
2	黄孝天	南昌大学医学院	32	107	7.0	8.0
3	张静怡	南昌大学医学院微生物学教研室	5	34	4.0	5.0
4	赵颖洁	南昌大学医学院微生物学教研室	2	3	1.0	1.0
5	刘曦	南昌大学医学院微生物学教研室	4	6	2.0	2.0