猪轮状病毒DN30209株VP4全长蛋白表达及多抗制备和鉴定

• 作者: 任晓峰 孙刘妹 窦秀静 郝雅环 魏小宁
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪轮状病毒 克隆 原核表达 抗体制备
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 10-17
• 页数: 8页
• 分类号: S858
• 字数: 5169字
• 语种: 中文

摘要

为开展猪轮状病毒（PRV）及其VP4蛋白相关特性研究，参照GenBank所收录的猪轮状病毒JL94、OSU等株序列设计一对特异性引物，从实验室分离鉴定的猪轮状病毒DN30209株扩增约2330 bp VP4全长基因，并成功构建重组质粒VP4-pMD18-T。重组质粒经测序、序列比对及分析。结果表明，DN30209株VP4全基因长2331 bp，与参考株JL94的核苷酸同源性为99.7%，氨基酸同源性为99.5%。将VP4基因连接到pGEX-6P-1原核表达载体中，构建并筛选出阳性原核表达载体重组质粒VP4-pGEX-6P-1。阳性重组质粒转化Rosetta宿主菌感受态细胞中，经IPTG诱导，获得以包涵体形式表达的重组蛋白，融合蛋白大小约为112 ku，与预期大小相符。回收、纯化并复性该蛋白，将其作为免疫原免疫大白兔，制备兔抗PRV VP4全长蛋白多克隆抗体，间接ELISA测定多抗效价到1??105，间接免疫荧光（IFA）和免疫印迹（Western blot）检测表明该多抗均可与PRV具有很好的抗原抗体反应性，为猪轮状病毒研究提供有效实验材料。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	任晓峰	东北农业大学动物医学学院	51	302	9.0	15.0
2	孙刘妹	东北农业大学动物医学学院	5	14	1.0	3.0
3	郝雅环	东北农业大学动物医学学院	2	6	1.0	2.0
4	窦秀静	东北农业大学动物医学学院	6	33	3.0	5.0
5	魏小宁	东北农业大学动物医学学院	1	1	1.0	1.0