OSF1在毕赤酵母菌中的分泌表达及其生物活性

• 作者: 冯潇雨 康东红 张洪美 曹维 王燕 王萍
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: OSF-1 毕赤酵母 蛋白表达 纯化 生物活性
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 医学与免疫生物技术
• 页码范围: 274-283
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.130207

摘要

为了研究人成骨细胞刺激因子(Human osteoblast-stimulating factor,OSF-1)的生物学活性,构建OSF-1高效毕赤酵母表达菌株并表达纯化具有生物活性的OSF-1.首先通过全基因人工合成的方法合成人osf-1基因,并克隆至毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K/osf-1,线性化后电转化酵母宿主菌GS115,构建P.pastoris GS 115/pPIC9K/osf-1,经MD、G418-YPD平板和PCR法筛选,获得多拷贝转化子.阳性表达菌株在25℃,经1％的甲醇诱导表达96 h,重组蛋白的表达量达到最大.经SDS-PAGE电泳分析所表达的重组蛋白约为18 kDa,与人成骨细胞刺激因子相符.表达上清经SP-Sephadex C-50离子交换层析进行纯化,得到纯度达98％以上的OSF-1. Western blotting鉴定该蛋白对人成骨细胞刺激因子抗体具有良好的抗原性.生物活性测定表明提纯的OSF-1能促进鼠成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化.利用重组毕赤酵母高效分泌表达了有生物活性的OSF-1,为进一步开展其抗骨质疏松活性研究及产业化开发奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王燕		83	677	14.0	21.0
2	康东红		20	74	5.0	7.0
3	王萍		64	433	13.0	17.0
4	张洪美		7	33	3.0	5.0
5	冯潇雨		4	15	1.0	3.0
6	曹维		7	33	3.0	5.0