成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒质粒的构建与鉴定

• 作者: 刘农乐 唐欢 廖文 李章华 潘峰 许海甲 赵强
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 核心结合因子α1 腺病毒 间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 511-514
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3877字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.04.014

摘要

目的：构建成骨细胞特异性转录因子--核心结合因子α1（Cbfa1）重组腺病毒载体，为后期应用Cbfa1基因治疗股骨头坏死、骨折和骨缺损等疾病奠定基础。方法：以目的基因Cbfa1全长cDNA为模板进行PCR扩增，将扩增产物克隆到pShuttle-CMV载体的相应酶切位点，获得目的基因载体pShuttle-CMV-Cbfa1，在大肠杆菌BJ5183中和pAdEasy-1同源重组，筛选阳性克隆，经酶切、PCR及测序鉴定，线性化后用脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增，用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测，酚氯仿抽提纯化病毒，AdEasy1/Cbfa1感染间充质干细胞（MSC）后检测Cbfa1的表达。结果：测序、酶切及PCR证实Cbfa1基因重组腺病毒载体构建成功，AdEasy1/Cbfa1感染MSC后Cbfa1的表达显著升高。结论：构建了含Cbfa1基因的重组腺病毒载体，该基因能促进MSC向成骨细胞分化，预示其可作为治疗基因应用于股骨头坏死、骨折和骨缺损的治疗。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵强	军事医学科学院基础医学研究所	17	195	5.0	13.0
2	李章华	武汉大学人民医院骨一科	53	358	10.0	15.0
3	刘农乐	军事医学科学院基础医学研究所	16	129	4.0	11.0
4	潘峰	武汉大学人民医院骨一科	25	140	7.0	11.0
5	唐欢	武汉大学人民医院骨一科	6	54	3.0	6.0
6	许海甲	武汉大学人民医院骨一科	8	91	4.0	8.0
7	廖文		2	7	1.0	2.0