细菌内同源重组构建pAdeasy-1/hp27mt腺病毒质粒

• 作者: 徐少勇 王家宁 邓长生 陈珺 黄永章
• 来源期刊: 郧阳医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 细菌 同源重组 重组腺病毒质粒 hp27mt
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 65-69
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 字数: 4046字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-9674.2003.02.001

摘要

目的:采用细菌内同源重组法高效制备含hp27mt基因的重组腺病毒质粒.方法:hp27mt自载体pORF9-hp27mt中切出,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,构成穿梭质粒pShuttle-CMV/hp27mt;然后再用经PmeI酶切的pshuttle-CMV/hp27mt转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183,采用细菌内同源重组法构建腺病毒质粒pAdeasy-1/hp27mt;筛选同源重组质粒阳性克隆,提取pAdeasy-1/hp27mt质粒经Pac Ⅰ酶切鉴定和PCR鉴定.结果:线性化的pShuttle-CMV/hp27mt转化含pAdeasy-1的超感受态 BJ5183,12-20h后获得了30%阳性重组质粒克隆,经酶切获得一大于20 kb的大片段和3.0 kb的特征性片段,PCR反应扩增出了275 bp的片段,证明重组腺病毒质粒中已成功插入目的基因hp27mt.结论:用细菌内同源重组法可制备含hp27mt的重组腺病毒质粒且经济高效、简便、快捷.为转染293细胞制备高滴度重组腺病毒提供高纯度的重组腺病毒质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐少勇	郧阳医学院附属人民医院消化科	68	210	7.0	11.0
2	邓长生	武汉大学中南医院消化内科	194	1314	18.0	24.0
3	王家宁	郧阳医学院临床医学研究所	119	709	13.0	20.0
4	黄永章	郧阳医学院临床医学研究所	66	379	11.0	16.0
5	陈珺	郧阳医学院附属人民医院消化科	18	58	3.0	6.0