细菌内同源重组快速构建和制备表达β-半乳糖苷酶的重组腺病毒

• 作者: 孔霞 王家宁 郭凌郧 黄永章
• 来源期刊: 郧阳医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 同源重组 腺病毒 基因治疗 β-半乳糖苷酶
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 页数: 6页
• 分类号: Q784
• 字数: 5600字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-9674.2004.01.001

摘要

目的:利用细菌内同源重组快速构建重组腺病毒质粒和制备重组腺病毒.方法:制备感受态BJ5183,将pAdEasy-1转化BJ5183,制备含pAdEasy-1的BJ5183感受态,将线性化的pShuttle-CMV-LacZ转化含pAdEasy-1的BJ5183感受态菌.采用细菌中同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdEasy-1-LacZ.pAdEasy-1-LacZ用PacⅠ线性化后,再用LipoVec介导其转染至AD293细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒,采用CsCl密度梯度离心法纯化重组腺病毒AdEasy-1-LacZ.采用X-gal染色观察LipoVec介导的重组腺病毒质粒的转染效果及病毒包装情况.将纯化的AdEasy-1-LacZ转染HVSMC,X-gal染色观察基因转染效率及基因表达情况.结果:pShuttle-CMV-LacZ成功地转化了含pAdEasy-1的BJ5183,并在其内发生了同源重组.X-gal染色证实了pAdEasy-1-LacZ转染AD293后,产生了重组腺病毒AdEasy-1-LacZ.病毒滴度为3.9×1012pfu/ml.AdEasy-1-LacZ转染HVSMC后,β-gal在HVSMC中得到了有效表达.结论:细菌内同源重组法是一种快速构建重组腺病毒质粒的方法, AdEasy-1-LacZ的制备为基因治疗研究提供了一良好对照载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孔霞	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	19	181	8.0	13.0
2	郭凌郧	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	26	189	9.0	12.0
3	王家宁	郧阳医学院附属人民医院心内科	119	709	13.0	20.0
7	黄永章	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	66	379	11.0	16.0