体外连接法快速高效构建表达β-半乳糖苷酶的重组腺病毒载体

• 作者: 王传成 王家宁 郭凌郧 黄永章
• 来源期刊: 郧阳医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 体外连接 腺病毒 β-半乳糖苷酶 PI-SceⅠ I-CeuⅠ
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 65-69,封二
• 页数: 6页
• 分类号: Q784
• 字数: 3749字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-9674.2006.02.001

摘要

目的:采用体外连接法构建和制备重组腺病毒Adeno-X-LacZ,为构建具有治疗价值的重组腺病毒载体奠定基础.方法:PI-Sce Ⅰ/I-Ceu Ⅰ酶切pShuttle2-LacZ穿梭质粒,回收4.6 kb的LacZ基因表达盒,与经过相同酶切的Adeno-X病毒DNA连接,连接产物用SwaⅠ酶切,最终产物转化DH5α.重组质粒用PCR法和PI-Sce Ⅰ/I-Ceu Ⅰ酶切鉴定.pAdeno-X-LacZ用PacⅠ线性化后,用脂质体介导其转染至AD293细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒,采用CsCl密度梯度离心法纯化重组腺病毒Adeno-X-LacZ.采用X-gal染色观察Adeno-X-LacZ在AD293细胞内包装和HVSMC表达情况.结果:PCR扩增可见312 bp特异性条带,PI-Sce Ⅰ/I-Ceu Ⅰ酶切重组质粒后释放出4.6 kb LacZ基因表达盒.X-gal染色证实了在AD293细胞内成功扩增包装出重组腺病毒Adeno-X-LacZ和LacZ基因在HVSMC中得到有效表达.结论:体外连接法是一种快速、简便、高效的构建重组腺病毒质粒的方法,本研究为构建具有治疗价值的重组腺病毒奠定了基础,Adeno-X-LacZ为研究腺病毒介导的基因转移提供了一良好的对照载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭凌郧	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	26	189	9.0	12.0
2	王家宁	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	119	709	13.0	20.0
3	黄永章	郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所	66	379	11.0	16.0