pAd-SIG腺病毒质粒构建及其在MCF-7细胞中的表达

• 作者: 代维 何勇 吴砂 朱慧芬 沈关心 袁晓梅 邢薇 雷萍
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人生长抑素受体2亚型 同源重组 腺病毒增强型绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 414-418
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 3452字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2007.05.009

摘要

目的 含人生长抑素受体2亚型(human somatostatin receptor subtype 2,hSSTr2)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒重组质粒的构建及表达.方法 采用PCR方法将hSSTr2以及IRES-EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,获得pShuttle-CMV/hSSTr2-EGFP,经Pme Ⅰ酶切,去磷酸化后转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183菌,细菌内同源重组构建腺病毒质粒pAdeasy-1/hSSTr2-EGFP(pAd-SIG),将其转染HEK293细胞进行病毒包装与滴度测定.重组腺病毒感染MCF-7细胞,流式细胞术检测其表达.结果 酶切、PCR及基因测序证实重组腺病毒质粒pAd-SIG构建成功,病毒滴度为8.2×109 IU/ml,流式细胞术结果显示hSSTr2在MCF-7细胞中表达阳性率为86.59%.结论 成功构建了重组腺病毒质粒pAd-SIG,并能在真核细胞表达,为体内外研究hSSTr2效应提供了基础.