pcDNA3-HIF-1α真核表达质粒的构建及其在MCF-7细胞中的表达

• 作者: 修瑞娟 张静 李宏伟 苏燕
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 低氧 低氧诱导因子-1α 质粒构建 基因表达 凋亡
• 年，卷（期）: 2006,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 888-893
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4254字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6325.2006.08.019

摘要

目的 构建低氧诱导因子1α(HIF-1α)真核表达质粒,并在MCF-7细胞中进行功能验证.方法 利用RT-PCR扩增带有Xba Ⅰ和HindⅢ酶切位点的HIF-1α编码基因,插入T载体测序正确后,克隆入pcDNA3真核表达载体,然后将其转染MCF-7细胞.Western blot和双荧光素酶报告基因法分别检测HIF-1α表达及其DNA结合活性;实时定量PCR检测HIF-1α对低氧诱导基因C-MET mRNA表达的影响;Caspase3/7活性检测来初步判断HIF-1α对低氧MCF-7细胞凋亡的影响.结果 酶切及测序结果 证明pcDNA3-HIF-1α表达质粒的DNA序列完全正确.将此质粒转染MCF-7细胞后,HIF-1α蛋白表达明显增加,它不仅增强了pGL3-EPO-HRE报告基因活性而且促进了C-MET mRNA的表达,同时还降低了低氧MCF-7细胞中Caspase3/7的水平.结论 pcDNA3-HIF-1α真核表达质粒构建成功,它不但具有很强的DNA结合和诱导活性,而且在细胞低氧过程中具有一定的抗凋亡作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苏燕		3	12	2.0	3.0
2	修瑞娟		10	40	3.0	6.0
3	李宏伟		4	23	2.0	4.0
4	张静		3	6	2.0	2.0