菌体内同源重组构建pAdEasy-1-Cat重组体

• 作者: 孙跃玲 涂远超 王家宁 黄从新 黄永章
• 来源期刊: 郧阳医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 同源重组 腺病毒载体 基因,过氧化氢酶 基因治疗 细菌
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 193-196
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 3190字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-9674.2003.04.001

摘要

目的:利用大肠杆菌BJ5183细菌内同源重组构建重组腺病毒载体. 方法: 自过氧化氢酶质粒载体pZeoSV2-Cat中酶切出Cat cDNA,亚克隆至质粒pBluescriptⅡsk(+)中,形成pBluescriptⅡsk(+)-Cat,自pBluescriptⅡsk(+)-Cat中酶切出Cat cDNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒pShuttle-CMV-Cat,在感受态大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAdEasy-1-Cat.对pAdEasy-1-Cat进行酶切鉴定和PCR鉴定. 结果: 线性化的pShuttle-CMV-Cat转化含pAdEasy-1的超感受态大肠杆菌BJ5183,24 h后获得了30%阳性重组质粒克隆,经酶切获得一大于20 kb的大片段和一4.5 kb的特征性条带,PCR反应扩增出209 bp片段. 结论: 应用细菌内同源重组能快速构建含Cat基因的重组腺病毒载体pAdEasy-1-Cat,为过氧化氢酶基因的研究及应用Cat基因进行再狭窄的防治研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄从新		644	4360	27.0	39.0
2	王家宁		119	709	13.0	20.0
3	黄永章		66	379	11.0	16.0
4	涂远超		32	124	6.0	9.0
5	孙跃玲	郧阳医学院附属太和医院心血管内科	5	20	3.0	4.0