人乳头瘤病毒11型L2NE7E6融合蛋白的原核表达及其诱发的T细胞免疫反应

• 作者: 任皎 周玲 张卉 田厚文 谭文杰 赵莉 郝明强 阮力
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒11型 尖锐湿疣 T细胞表位 免疫治疗
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 474-478
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 3790字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.04.005

摘要

目的：在原核表达系统中表达人乳头瘤病毒11型（HPV11）L2NE7E6融合蛋白，纯化蛋白后免疫小鼠，检测其诱发的T细胞免疫水平，并筛选HPV11 E6、E7特异的T细胞表位肽。方法：用重叠PCR方法构建HPV11 L2NE7E6融合基因并插入原核表达质粒，在大肠杆菌中经IPTG诱导表达融合蛋白L2NE7E6，用SDS-PAGE和West-ern印迹鉴定融合蛋白的表达。Q柱纯化蛋白后免疫C57BL/6小鼠，分别用覆盖HPV11 E6和E7蛋白序列的肽库，采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测其诱发的E7、E6特异的T细胞免疫反应，并筛选E7、E6特异的T细胞表位肽。结果：在原核表达系统中有效表达了HPV11 L2NE7E6融合蛋白，蛋白纯化后免疫C57BL/6小鼠，分别能检测到针对HPV11 E6、E7肽库刺激产生的特异性T细胞免疫反应。经肽池筛选到1条强的E6 T细胞表位肽E6aa41-55（AEI-YAYAYKNLKVVW）；而E7只筛选到2条弱的T细胞表位肽，分别为E7aa53-67（QILTCCCGCDSNVRL）和E7aa73-87（DGDIRQLQDLLLGTL）。结论：HPV11 L2NE7E6融合蛋白能诱发小鼠产生E6、E7特异性细胞免疫反应，可作为尖锐湿疣免疫治疗候选疫苗。