人1型酪蛋白激酶的真核表达及其在肿瘤细胞中的定位

• 作者: 冀全博 叶棋浓 周丽英 康磊 张强 徐小洁 李玲 王岩 王荣福 黄蓉
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人1型酪蛋白激酶 真核表达 细胞定位
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 451-454
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2849字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.04.001

摘要

目的：构建带FLAG标签的人1型酪蛋白激酶（CK1）基因的真核表达载体，获得其表达产物，并研究该激酶在骨肉瘤U2OS、乳腺癌ZR-75-1、肝癌HepG2等多种肿瘤细胞中的表达及定位情况。方法：应用PCR技术从人乳腺文库中扩增人CK1基因的全长编码区，将其克隆到带FLAG标签的pCMV-Tag2B载体中；将重组质粒转染骨肉瘤U2OS细胞、乳腺癌ZR-75-1细胞、肝癌HepG2细胞，以SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达情况；细胞免疫荧光观察FLAG-CK1质粒在骨肉瘤U2OS细胞、乳腺癌ZR-75-1细胞、肝癌HepG2细胞中的细胞定位。结果：双酶切和测序结果显示FLAG-CK1真核表达质粒构建成功；SDS-PAGE和Western印迹结果表明，FLAG-CK1转染骨肉瘤U2OS细胞、乳腺癌ZR-75-1细胞、肝癌HepG2细胞后成功表达；细胞免疫荧光实验显示，CK1在骨肉瘤U2OS细胞、乳腺癌ZR-75-1细胞、肝癌HepG2细胞的胞核和胞质中均有分布，且胞核信号强于胞质。结论：构建了CK1的真核表达载体，且FLAG-CK1能在不同肿瘤细胞系的细胞核和细胞质中表达，为进一步研究CK1对细胞的调控奠定了实验基础。