溶菌酶活性测定方法的改进及其在重组人溶菌酶质量标准建立中的应用

• 作者: 侯利平 刘曙晨 原剑 宋纯艳 张拓 甄蓓 韩治国 魏开华 黄亚娟
• 来源期刊: 分析测试学报
• 学科: 化学
• 关键词: 重组人溶菌酶 比浊法 双直线法 Lowry法
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 917-921,927
• 页数: 6页
• 分类号: O657.3|O629.8
• 字数: 4493字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-4957.2014.08.010

摘要

获得一种趋于均相反应体系的比浊法,用于重组人溶菌酶活性的研究,并建立相关操作规程和质量标准.通过显微计数法进行底物菌液质控,改进酶与菌液的混合方式和最佳酶用量,采用“双直线法”优化反应计时区间,并精确测定重组人溶菌酶含量.显微镜菌体计数法确定0.3 mg/mL底物菌液中菌体数保持在1.1 ×108个/mL左右;酶与菌液在样品池内经吸排法快速混合可趋近均相体系;酶的最佳用量为3μg;确定反应计时区间为0～60s;依据所制定的酶活性操作规程,确定重组人溶菌酶活性质量标准为45 000～ 65 000U/mg,日内、日间相对标准偏差均小于5％;优选Lowry法并精确测定蛋白含量为(1.0±0.1)mg/mL.改进后的方法稳定性得到明显提高,且操作简便、结果可靠,已被3家研究单位、企业验证并接受.建立的重组人溶菌酶活性和含量测定质量标准及操作规程具有实际参考价值.