二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定

• 作者: 亢中奎 刘羿辰 姜浩武 张晋霞 潘磊 王金胜 邓宁
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: bFGF ds-Diabody 毕赤酵母 肺癌细胞
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 550-554
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.13431/j.cnki.immunol.j.20140120

摘要

目的 为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性.方法 将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并进行镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化.间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK8法和划痕实验检验其肿瘤抑制作用.结果 成功构建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表达载体,并获得4株高表达酵母工程菌,经1％甲醇诱导96 h表达量即可恒定,表达量可达158 mg/L.SDS-PAGE及Western blot结果显示,目的蛋白大小约Mr35 000左右.通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95％以上.ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF特异性结合.CCK8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌细胞株A549的增殖,最大抑制率为43.4％.划痕实验表明ds-Diabody可以抑制肿瘤细胞的迁移.结论 研究结果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在毕赤酵母中可获得高效表达,且具有很好的生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邓宁		60	325	11.0	15.0
2	王金胜		3	0	0.0	0.0
3	张晋霞		2	0	0.0	0.0
4	姜浩武		1	0	0.0	0.0
5	亢中奎		2	0	0.0	0.0
6	潘磊		4	1	1.0	1.0
7	刘羿辰		2	8	1.0	2.0