rhKD／APPvar毕赤酵母分泌表达质粒的构建及其重组蛋白的表达和纯化

• 作者: 任立群 孟威宏 王强 王心童 王虹蛟 颜炜群
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 毕赤酵母菌 重组KD/APP变异体 牛胰蛋白酶抑制剂 淀粉样蛋白前体
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 529-533
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4420字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140313

摘要

目的：构建高效分泌表达重组人淀粉样蛋白前体 Kunitz 型蛋白酶抑制剂结构域变异体（rhKD／APPvar）的毕氏酵母工程菌，建立适合大规模发酵、纯化 rhKD／APPvar的工艺。方法：利用已构建的 rhKD／APP表达质粒，在其活性中心两侧设计2个酶切位点（ApaⅠ和SacⅡ），实现人 KD／APP 活性中心 RAM 与BPTI活性中心KAR的替换，构建 rhKD／APPvar表达质粒。将重组质粒转化到酵母菌 X-33中，优化 rhKD／APPvar表达最佳 pH值，使 rhKD／APPvar获得高效表达。利用阳离子交换树脂和超滤除盐对重组蛋白进行纯化。结果：酶切鉴定和测序分析显示成功构建了KD／APPvar-pPICZαC重组质粒。经电转化成功地将重组质粒转化至酵母菌 X-33中。SDS-PAGE分析，甲醇诱导表达后在相对分子质量约6700处出现蛋白条带，pH 6.0、甲醇诱导120 h蛋白表达水平最高，经纯化获得纯度达95％的重组蛋白。结论：成功构建 KD／APPvar-pPICZαC重组质粒，经毕赤酵母表达和纯化获得了 rhKD／APPvar蛋白。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	颜炜群	吉林大学再生医学科学研究所再生医学系	112	467	9.0	16.0
2	王强	解放军第461医院内科	172	689	13.0	19.0
3	孟威宏	沈阳军区总医院心血管内科	48	175	7.0	10.0
4	王虹蛟	解放军第461医院内科	32	29	4.0	4.0
5	王心童	吉林大学中日联谊医院神经内科	18	33	4.0	5.0
6	任立群	吉林大学再生医学科学研究所再生医学系	83	416	10.0	16.0