人RACK1蛋白在HEK-293 T和BL21细胞中的表达及COS7细胞的定位

• 作者: 乔正 刘晓颖 徐雪琴 李春雨 潘林鑫 范礼斌 赵健
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: RACK1 基因表达 细胞定位 BL21
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1189-1192
• 页数: 4页
• 分类号: R341|R394.2
• 字数: 3207字
• 语种: 中文

摘要

目的构建可以表达有活性的蛋白激酶 C 受体(RACK1)的重组质粒，检测其在细胞内的表达与定位情况。方法设计上下游引物，以RACK1全长cDNA序列为模板， PCR扩增出 RACK1序列，分别构建到载体 pcDNA3.1和pGEX-5X-3。转染pcDNA3.1-FLAG-RACK1到人胚胎肾细胞(HEK-293T)和非洲绿猴肾成纤维细胞(COS7细胞)，转化pGEX-5X-3-RACK1到大肠杆菌 BL21感受态细胞中表达， Western blot法和考马斯亮蓝染色法检测RACK1表达情况，免疫荧光法研究其细胞内定位。结果成功构建了 pcD-NA3.1-FLAG-RACK1和GEX-5X-3-RACK1重组质粒。 West-ern blot证明了其在HEK-293T细胞中的表达，考马斯亮蓝染色显示其在BL21菌株也能大量表达，免疫荧光显示RACK1在COS7的细胞核与细胞质中均有分布。结论人RACK1在HEK-293T细胞和BL21菌株中均能有效表达，在COS7细胞的胞质、胞核均有分布，为进一步研究人RACK1基因的功能奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范礼斌	安徽医科大学生命科学院生物学教研室	53	174	8.0	9.0
2	刘晓颖	安徽医科大学生命科学院生物学教研室	57	121	6.0	8.0
3	潘林鑫	安徽医科大学生命科学院生物学教研室	19	40	3.0	5.0
4	赵健	安徽医科大学生命科学院生物学教研室	4	34	3.0	4.0
5	徐雪琴	安徽医科大学生命科学院生物学教研室	3	11	2.0	3.0
6	乔正	安徽医科大学生命科学院生物学教研室	3	17	2.0	3.0
7	李春雨	安徽医科大学生命科学院生物学教研室	5	16	3.0	4.0