猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ主要抗原表位区原核表达及其间接ELISA方法的建立

• 作者: 何孔旺 倪艳秀 吴东 李郁
• 来源期刊: 农业科学与技术（英文版）
• 关键词: 猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅡ主要抗原表位 原核表达 蛋白纯化 ELISA
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 分子生物学?组织培养
• 页码范围: 13-16,38
• 页数: 5页
• 字数: 187字
• 语种: 英文

摘要

[目的]以原核表达的重组蛋白作为检测抗原，建立间接 ELISA方法用来检测猪血清中APP抗体。[方法]将猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅡ主要抗原表位区基因片段克隆至原核表达载体 pET-28a（+），构建重组质粒 pET-ApxⅡA1。将重组质粒转化至宿主菌 BL21（DE3）中进行表达。通过 Western-blot分析重组蛋白免疫原性。用纯化的重组蛋白作为包被抗原建立检测猪 APP抗体的间接 ELISA方法，并优化反应条件，确定抗原的最佳包被量和血清的最佳稀释度。[结果]经 PCR双酶切及测序鉴定，重组质粒构建成功，诱导表达纯化后，重组蛋白可被 APP阳性血清特异性的识别，表明表达产物具有良好的免疫原性。用纯化的重组蛋白初步建立了检测 APP抗体的间接ELISA方法，用该方法与商品化 ApxⅣ抗体检测试剂盒分别对94份临床非免疫血清样品进行检测，结果两者的符合率为90.4%。[结论]所建立的间接 ELISA 方法具有良好的特异性和敏感性，为流行病学调查和疫苗免疫效果评估提供了技术手段。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何孔旺	江苏省农业科学院兽医研究所	101	1368	22.0	33.0
2	倪艳秀	江苏省农业科学院兽医研究所	30	581	12.0	24.0
3	李郁	安徽农业大学动物科技学院	140	887	14.0	23.0
4	吴东	安徽农业大学动物科技学院	1	0	0.0	0.0