SDF-1α-GFP基因重组腺病毒载体的构建及其转染大鼠心肌细胞的条件优化研究

• 作者: 李海瑞 李自成 郑栋 郭军
• 来源期刊: 临床心血管病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基质细胞衍生因子1α基因 重组腺病毒 载体构建 H9C2细胞
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 临床基础研究
• 页码范围: 1086-1090
• 页数: 5页
• 分类号: R373.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13201/j.issn.1001-1439.2014.12.020

摘要

目的:构建基质细胞衍生因子1α-绿色荧光蛋白(SDF-1 α-GFP)重组腺病毒载体并摸索其转染大鼠心肌细胞系的最佳条件.方法:人工合成SDF-1α基因并插入线性化表达载体,转化感受态E.coliDH5a细胞.筛 选阳性菌落,采用DNA测序技术测定目的基因序列.用获得的重组腺病毒(adenovirus,Ad)载体转染293T细胞,采用qPCR技术测定SDF-1α的mRNA表达水平.用不同滴度感染复数Ad-SDF-1α-GFP转染H9C2心肌细胞系,采用倒置相差显微镜及荧光显微镜分别在24和48 h检测细胞形态及GFP蛋白阳性的细胞比率.结果:DNA测序证实SDF-1α基因构建成功.qPCR结果显示,与阴性对照组相比,MOI 2000组的SDF-1a的表达水平增加了约10 000倍,MOI 8000组的SDF-1α表达水平增加了约210 000倍.转染H9C2心肌细胞系的结果显示,MOI值为2 000、3 000、4 000、5 000、6 000、7 000及8 000的SDF-1α-GFP转染H9C2细胞48 h后,其转染率分别为(45±5.04)％、(75±5.70)％、(80±5.67)％、(85±6.45)％、(90％±6.90)％、(90±5.22)％和(95±5.36)％,但是当MOI值区间为5 000～8 000时,细胞形态上出现明显损伤.结论:MOI值为4 000的Ad-SDF-1α-GFP转染H9C2细胞系48 h能达到最佳的转染效率,并最小程度损伤细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李自成		140	944	17.0	25.0
2	郭军		56	201	7.0	12.0
3	郑栋		4	7	1.0	2.0
4	李海瑞		5	14	2.0	3.0