Raf-1基因重组腺病毒 siRNA 载体构建及其对大鼠心肌细胞肥大的影响

• 作者: 刘春杰 郑亚萍
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Raf-1 小干扰RNA 重组腺病毒载体 心肌细胞 大鼠
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 分类号: R-33
• 字数: 4130字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2016.04.004

摘要

目的：构建特异性抑制大鼠Raf-1基因的重组腺病毒载体，并将其体外转导大鼠心肌细胞中进行功能鉴定。方法合成针对大鼠Raf-1的靶序列及阴性对照序列，经退火形成的DNA双链定向克隆到穿梭质粒pAdTrackCMV中获得pAdTrack-siRaf-1质粒，PmeI线性化后在BJ5183细菌中与pAdEasy-1骨架质粒进行同源重组获得pAd-siRaf-1质粒，后转染HEK293细胞，包装获得pAd-siRaf-1腺病毒颗粒，继而感染原代培养的心肌细胞，通过Western blot方法检测siRNA对Raf-1、NF-κB基因的抑制效率，液体闪烁计数仪测定3 H-亮氨酸（[3 H]-leu）掺入率，用HJ2000图像分析系统测定细胞表面积。结果重组腺病毒载体经酶切、鉴定正确，制备的病毒感染效率高，携带Raf-1的病毒颗粒能够在蛋白水平有效抑制Ang II诱导心肌细胞Raf-1的表达、细胞表面积及[3 H]-leu的增加并下调Raf-1、NF-κB表达。结论成功构建了pAd-siRaf-1重组腺病毒载体，并在HEK293细胞中包装成重组腺病毒，转染心肌细胞后能有效抑制Raf-1、NF-κB表达，抑制Ang II诱导的心肌细胞肥大。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑亚萍	漯河医学高等专科学校生理教研室	34	102	5.0	8.0
2	刘春杰	漯河医学高等专科学校药理教研室	29	124	5.0	10.0