大肠杆菌Nissle1917 L-天冬酰胺酶Ⅱ基因在大肠杆菌BL21中的表达与抗肿瘤活性

• 作者: 丁学知 夏立秋 孙运军 张友明 张旭 梁毅偈 白利明 胡胜标 颜富
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: L-天冬酰胺酶Ⅱ 大肠杆菌 克隆 抗肿瘤
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 基因克隆及功能研究
• 页码范围: 607-613
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130263

摘要

[目的]从大肠杆菌Nissle 1917中获得L-天冬酰胺酶Ⅱ基因,并研究其抗肿瘤活性.[方法]以大肠杆菌Nisslel917基因组为模板PCR扩增L-天冬酰胺酶Ⅱ基因,克隆至可诱导表达载体pET28a上.将L-天冬酰胺酶Ⅱ表达载体pET28a-asp转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并通过IPTG诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和液相色谱-质谱(LC-MS)对表达的L-天冬酰胺酶Ⅱ进行鉴定,并通过镍柱亲和层析纯化收集表达出的L-天冬酰胺酶Ⅱ.用纯化定量以后的L-天冬酰胺酶Ⅱ作用小鼠乳腺癌4T1细胞、人肝癌Hep-3B细胞和人脐静脉内皮细胞HUVEC.[结果]来自于大肠杆菌Nissle 1917的L-天冬酰胺酶Ⅱ基因可在大肠杆菌BL21中高效表达并通过LC-MS得到鉴定,细胞毒性实验结果表明L-天冬酰胺酶Ⅱ对4T1细胞和Hep-3B细胞的生长具有较强的抑制作用,而对人脐静脉内皮细胞HUVEC的生长无明显抑制效果.[结论]来源于大肠杆菌Nissle1917的L-天冬酰胺酶Ⅱ能显著抑制4T1细胞和Hep-3肿瘤细胞的生长,而对人正常组织细胞的生长无明显抑制效果,为进一步研究L-天冬酰胺酶Ⅱ特异性抗肿瘤作用机制和对实体瘤的应用研究奠定了重要基础.