人FAM172A基因慢病毒载体的构建及其在巨噬细胞中的表达

• 作者: 俞立波 包玉倩 屠印芳 张蓉 李梅芳 李连喜 贾伟平 陆俊茜
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: FAM172A基因 慢病毒载体 巨噬细胞
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 25-29
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3526字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人FAM172A基因慢病毒载体,并包装慢病毒FAM172A感染人巨噬细胞予以鉴定.方法 以PDC315-FAM172A为模板扩增FAM172A基因全长序列后,与慢病毒载体pLenti6.3/V5-GFP经酶切、连接转化大肠杆菌,挑取阳性克隆,行菌液PCR、酶切及测序鉴定.将鉴定正确的FAM172A基因慢病毒载体和病毒包装质粒共转染FT293细胞包装慢病毒FAM172A,测定病毒效价.Western blot和QPCR验证慢病毒FAM172A感染巨噬细胞效果.结果 菌液PCR、酶切及测序结果显示FAM172A基因成功插入到慢病毒载体中.病毒包装后荧光显微镜观察到FT293细胞中有大量绿色荧光,病毒效价为1.2×108TU/ml.Western blot和QPCR结果显示,慢病毒FAM172A侵染靶细胞后可明显增加目的基因FAM172A的表达.结论 成功构建慢病毒FAM172A,为后续FAM172A基因功能研究奠定了基础.