人miR-1908慢病毒载体构建及在人脂肪前体细胞中的表达验证

• 作者: 倪毓辉 史春梅 夏黎 季晨博 庞玲霞 杨蕾 郭锡熔 陈玲
• 来源期刊: 中国儿童保健杂志
• 学科: 医学
• 关键词: miR-1908 慢病毒 人脂肪前体细胞
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 科研论著
• 页码范围: 1018-1021
• 分类号: R394
• 语种: 中文
• DOI: 10.11852/zgetbjzz2014-22-10-04

摘要

目的 构建人miR-1908慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪前体细胞中过表达效果.方法 以人脂肪细胞基因组DNA为模板,PCR高保真扩增包含miR-1908区域上下游各100bp左右的基因组DNA,亚克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染HEK-293T细胞,包装病毒,收取病毒上清,纯化后感染人脂肪前体细胞,36 h开始观察荧光标记,72 h收取细胞,抽提RNA,Realtime PCR检测慢病毒感染下miR-1908的相应表达量.结果 成功构建人miR-1908慢病毒表达载体,包装获得的病毒感染人脂肪前体细胞的效率可达到70％以上,miR-1908过表达水平可接近2倍.结论 本研究成功构建了人miR-1908慢病毒过表达载体,包被的慢病毒可以在人脂肪前体细胞中实现过表达效果,为后续功能研究奠定了基础.