拳卷地钱基因组DNA提取及ISSR-PCR扩增体系优化

• 作者: 周雨晴 朱华 杜沛霖 王跃峰 白燕远
• 来源期刊: 时珍国医国药
• 学科: 医学
• 关键词: 拳卷地钱 DNA提取 ISSR-PCR 正交设计 体系优化
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 中医现代研究
• 页码范围: 1498-1500
• 页数: 3页
• 分类号: R284.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0805.2014.06.093

摘要

目的 建立一种拳卷地钱基因组DNA的提取方法;对影响拳卷地钱ISSR-PCR反应的各因素进行优化,建立稳定的反应体系.方法 采用改进的CTAB法提取拳卷地钱基因组DNA;以Taq酶、Mg2+、dNTP和引物4因素3水平的正交设计对拳卷地钱ISSR-PCR反应体系进行优化.结果 采用改进的CTAB法提取的拳卷地钱基因组DNA质量高,且适用于ISSR-PCR扩增;获得拳卷地钱最佳反应体系(20μl)为:Taq酶0.5U,Mg2+ 2.0 mmol/L,dNTP 250 μmol/L,模板DNA 50ng,引物0.6μmol/L.结论 建立并优化了拳卷地钱总DNA提取方法及ISSR-PCR反应体系.