中华鼢鼠卵透明带3基因(mZP3)真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达

• 作者: 吴景龙 周智敏 张冬辉 李昊 郑雪莉 隋丹丹 韩崇选
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 中华鼢鼠 卵透明带3(ZP3) 真核表达 免疫不育 蛋白免疫印迹
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 408-413
• 页数: 6页
• 字数: 4660字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.03.015

摘要

卵透明带3 (zona pellucida 3,ZP3)蛋白是精卵结合最重要的受体.为了构建中华鼢鼠(Myospalax ontanierii)卵透明带3(mZP3)基因真核表达载体,本研究利用PCR方法得到加入酶切位点的mZP3片段,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,体外转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO cell)和尾静脉注射昆明小鼠(Mus musculus)体内,利用RT-PCR和Western bolt技术检测其表达情况.双酶切和基因测序鉴定结果表明,所构建的表达载体是pEGFP-mZP3;倒置显微镜观察到发绿色荧光的成功转染的细胞;RT-PCR和Western bolt检测结果表明,目的基因mZP3在CHO细胞中成功表达,并且小鼠肝脏内也检测到目的基因.研究结果表明,卵透明带3基因能够在CHO真核细胞内表达,为后期基因疫苗防治中华鼢鼠提供依据.