重组融合蛋白Tumstatin-TNF-α分泌型真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

• 作者: 姚丽娟 孔建新 孙安源 张林杰 濮跃晨 罗以勤 赵亮
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤坏死因子α 重组融合蛋白质类 遗传载体 真核细胞
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 357-361
• 页数: 5页
• 分类号: R73|R341|R392-33|R394.2
• 字数: 4632字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2008.04.001

摘要

目的 构建重组融合蛋白TumstatinTNF-α的分泌型真核表达载体并检测其在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)中的稳定表达.方法 以人胚肾293细胞为材料,提取总RNA,用RT-PCR方法合成人turristatin cDNA,将该cDNA克隆到pGEM-T载体获得重组质粒pGEM-T/tumstatin.利用PCR从pGEM-T/tumstatin和PBV220-TNF-α载体中分别扩增出sig-tumstatin-linker和linkerTNF片段,将其克隆得到sig-tumstatin-linker-TNF片段,sig-tumstatin-linker-TNF片段经酶切后,插入经同样酶切pIRESneo3质粒,利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定对获得的sig-tumstatin-linke-TNF基因片段及重组载体进行验证.将重组sig-tumstatin-linker-TNF真核表达载体转染到CHO-K1对其表达状况进行检测.结果 所获得的sig-tumstatin-linker-TNF片段(1.32kb)序列与报道的序列完全一致.酶切鉴定的结果表明含肿瘤抑素基因的重组pIRESneo3/sig-tumstatin-linker-TNF表达载体构建成功.转染重组pIRESneo3/sig-tumstatin-linker-TNF的CHO-K1表达了肿瘤抑素融合蛋白tumstatin-linker-TNF.从生长曲线结果来看,转染pIRESneo3/sig-tumstatin-linker-TNF真核表达载体和转染pIRESneo3的CHO-K1比未转染的CHO-K1细胞的生长速度要慢.结论 成功地构建了重组人肿瘤抑素融合蛋白的真核表达载体,并获得能稳定表达人肿瘤抑素融合蛋白的CHO-K1.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张林杰	安徽医科大学免疫学教研室	71	330	9.0	12.0
2	赵亮	安徽医科大学免疫学教研室	20	62	5.0	6.0
6	罗以勤	安徽医科大学附属省立医院检验科	27	130	7.0	10.0
7	孔建新	安徽医科大学附属省立医院检验科	14	76	6.0	8.0
8	濮跃晨	安徽医科大学附属省立医院检验科	10	36	3.0	6.0
9	姚丽娟	安徽医科大学附属省立医院检验科	18	81	6.0	8.0
10	孙安源	安徽医科大学附属省立医院检验科	6	39	3.0	6.0