中华绒螯蟹△9脂肪酸去饱和酶基因克隆与原核表达

• 作者: 何杰 刘启彬 姚琴琴 成永旭 施秋燕 杨志刚 杨筱珍 王瑶 郭子好
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 中华绒螯蟹 △9脂肪酸去饱和酶 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1177-1185
• 页数: 9页
• 分类号: S917
• 字数: 7357字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2015.14563

摘要

根据中华绒螯蟹FAD9基因cDNA序列(Accession Number: JQ693685)设计引物,扩增得到中华绒螯蟹FAD9基因的开放阅读框(ORF),用原核表达载体pCold-TF DNA成功构建重组表达载体pCold-fad9,将pCold-fad9转入大肠杆菌BL21 (DE3)pLysS,在异丙-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下进行表达.SDS-PAGE分析表明,诱导后出现的特异性蛋白条带,大小与预期理论值(95.10 kD)相符.当IPTG浓度为0.3 mmol/L时,在15℃条件下诱导20 h,重组蛋白的表达量最高.目的蛋白主要存在于上清溶液中,为可溶性表达.利用镍离子亲和层析柱对重组蛋白进行了纯化,用Western-blotting方法验证了该重组蛋白可以与anti-His抗体特异性结合.研究结果为中华绒螯蟹FAD9重组蛋白的大量纯化及活性检测奠定基础,也为今后进一步开展脂肪酸去饱和酶功能的研究提供参考.