致病性沙门菌SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 史晗 张宇霞 曾巧英 李儒 武鑫
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 沙门菌 实时荧光定量PCR MALDI-TOF-MS
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 270-274
• 页数: 5页
• 分类号: S852.612
• 语种: 中文

摘要

为建立一种灵敏、特异、快速地检测食品中致病性沙门菌的方法,针对沙门菌致病性菌株特有的invA基因设计引物,PCR扩增目的片段,构建重组质粒pMD19-T-inv285,将其作为标准品进行real-timePCR反应体系的优化和标准曲线的绘制,并进行灵敏度、特异性及稳定性检测;同时用该方法对90份肉品样品进行检测.结果显示,建立的致病性沙门菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的标准曲线方程为y=-3.397 1 x+27.313,相关系数r2=0.999 6.该方法的灵敏度为5×10° copies/μL,是普通PCR(5×102 copies/μL)的100倍.对10种常见食源性细菌的检测结果均为阴性;组内和组间重复试验的变异系数均低于1％.对90份肉品样品的检出率(6/90,6.67％)显著高于快速MALDI-TOF-MS法和传统的细菌分离鉴定方法(均为3/90,3.33％).结果表明,本试验建立的致病性沙门菌SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR灵敏度高,且特异、稳定,适用于食品中致病性沙门菌的快速检测.