弓形虫profilin蛋白基因的克隆表达及序列分析

• 作者: 张念章 朱兴全 翁亚彪 胡玲英 高琦
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 弓形虫 profilin蛋白基因 遗传变异 序列分析 原核表达 B细胞抗原表位
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: S852.723
• 语种: 中文

摘要

为研究弓形虫profilin(prf)蛋白基因的遗传变异规律和表达产物的反应原性,以9个来源于不同宿主和地方的弓形虫虫株基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增该基因并测序.将测序结果与从ToxoDB网站下载的4株弓形虫序列一起进行比对分析,用最大简约法绘制系统发育树.再以弓形虫RH株虫体总RNA为模板,使用RT-PCR方法扩增prf基因片段,并将其克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,转化入表达菌BL21 (DE3)后,使用IPTG进行诱导表达,应用Western-blot对重组蛋白的反应原性进行分析.同时,将弓形虫RH株prf基因编码区序列翻译成氨基酸序列,利用生物信息学软件对其亲疏水性、跨膜结构域、二级结构及B细胞抗原表位进行分析.结果显示,9个弓形虫虫株的prf基因长度均为3 552bp,一致性大于99.5％.系统发育树分析表明,弓形虫虫株的聚类没有规律.SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,Profilin蛋白的分子质量约为30 ku,且反应原性较好.蛋白结构预测结果显示,该蛋白含有4个亲水区,无跨膜区,7个α螺旋,8个β折叠,4个β转角,2个无规则卷曲和7个线性B细胞抗原表位.本研究结果表明,弓形虫prf基因可作为抗弓形虫疫苗候选分子.