刚地弓形虫肌动蛋白profilin的原核表达和纯化

• 作者: 伊焕发 李会敏
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 profilin 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1109-1114
• 页数: 6页
• 分类号: R382.5
• 字数: 4080字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20170608

摘要

目的:探讨刚地弓形虫肌动蛋白profilin(TgPRF)的原核表达体系和纯化条件,为后续的抗肿瘤免疫佐剂研究提供依据.方法:以弓形虫RH株速殖子的cDNA为模板,采用一对特定的引物扩增TgPRF基因的编码区.PCR产物双酶切后克隆入pET28a(+)载体中.重组的pET28a(+)-TgPRF质粒转化E.coli DH5α感受态细胞.双酶切鉴定阳性克隆,并选取测序正确的质粒转化E.coli BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导表达4 h,SDS-PAGE法检测TgPRF蛋白的表达,Western blotting法检测重组蛋白His-prolilin的表达.结果:PCR扩增产物长度为492 bp.经双酶切和测序,重组质粒pET28a-TgPRF连接产物构建成功.SDS-PAGE检测,目的蛋白在超声菌液的上清中表达.经Ni-NTA琼脂糖凝胶柱纯化,获得纯化的TgPRF蛋白(纯度>90%).Western blotting检测,重组TgPRF蛋白能被Anti-His抗体识别.结论:成功构建重组质粒pET28a-TgPRF,并实现可溶性原核表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李会敏	吉林大学第一医院转化医学研究院移植免疫实验室	5	7	2.0	2.0
5	伊焕发	吉林大学第一医院转化医学研究院移植免疫实验室	2	6	1.0	2.0