凡纳滨对虾过敏原蛋白Lit v 1.2的原核表达与纯化

• 作者: 何颖 李文 赖荷 邹泽红 陈惠芳 陶爱林 黄于艺
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 凡纳滨对虾 过敏原 原肌球蛋白 重组表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1659-1662
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2393字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2015.12.016

摘要

目的:诱导表达凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)过敏原蛋白Lit v 1.2,并利用6-His标签获得纯化蛋白.方法:用NdeⅠ和PstⅠ双酶切实验室前期构建保存的pGEM-T-Lit v 1.2质粒,将目的基因与表达载体pET44a连接,转入表达菌株Rosetta,通过氨苄青霉素( Amp)抗性基因筛选,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷( IPTG)诱导表达,获得Lit v 1.2蛋白. 通过亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化效果. 结果:成功构建了重组质粒pET44a-Lit v 1.2,SDS-PAGE结果显示Lit v 1.2基因在大肠杆菌Rosetta中获得高效的可溶性表达,蛋白质分子量与理论值相符,且获得的目标蛋白纯度高. 结论:本研究通过原核表达及亲和层析获得高产量、高纯度的凡纳滨对虾过敏原蛋白Lit v 1.2 ,为进一步研究Lit v 1.2的免疫学特性奠定基础.