可调控性 uPA 诱导表达系统的构建及功能鉴定

• 作者: 于士颜 任晓楠 刘文文 周文江 周晓辉 周晓静 陈丽香
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 可调控肝脏损伤 Alb uPA 肝脏人源化小鼠
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 分类号: Q95-33|R332
• 字数: 5557字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2015.001.001

摘要

目的：构建可调控性尿激酶型纤溶酶原激活物（ urokinase－type plasminogen activator ，uPA）诱导表达系统并进行相关鉴定，可为进一步构建可诱导型肝脏人源化uPA－SCID动物模型奠定基础。方法可调控性uPA诱导表达系统即在强力霉素（ doxycycline ，Dox）诱导下通过tet－on系统调控uPA表达。为此，需要构建两个重组质粒，分别为pLNHXO1O2－Alb－GLUC－FMN2A－rtTA和pLNHXO5O6－TRE2－uPA－IRES－ZsGreen，前者引入Gaussia荧光素酶（gaussia enzyme fluorescent element，Gluc）与四环素反式激活因子（reverse tetracycline transactivator，rtTA）偶联表达，以便于监测rtTA表达水平；后者同时偶联表达ZsGreen，以便于用荧光显微镜观察基因表达。重组逆转录病毒载体进行表达功能鉴定后，将构建质粒与病毒包装衣壳蛋白VSV－G质粒共转染GP2－293包装细胞系后获得具有感染能力的病毒颗粒，利用该病毒感染NIH／3T3细胞，并用G418筛选出阳性细胞；期间各取部分细胞，使用PCR方法鉴定其基因组内是否含有相应基因转录调控本。结果成功构建 pLNHXO1O2－Alb－GLUC－FMN2A－rtTA 和pLNHXO5O6－TRE2－uPA－IRES－ZsGreen 克隆。功能鉴定显示， pLNHXO1O2－Alb－GLUC－FMN2A－rtTA 克隆可表达rtTA；pLNHXO5O6－TRE2－uPA－IRES－ZsGreen克隆转染HepG－Tet－on细胞，加Dox可诱导uPA表达。包装病毒感染NIH／3T3细胞后通过G418筛选获得单细胞克隆，通过PCR方法鉴定表明其基因组内含有相应转录本，从而成功构建uPA诱导表达稳定细胞株。结论本研究初步建立了可调控性uPA诱导表达系统，从而为可诱导肝损的uPA－SCID转基因小鼠的构建及在此基础上的肝脏人源化动物模型的建立奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周文江		36	167	6.0	11.0
2	周晓辉		15	59	4.0	7.0
4	任晓楠		8	14	2.0	3.0
7	周晓静		5	1	1.0	1.0
8	陈丽香		7	15	2.0	3.0
9	刘文文		1	0	0.0	0.0
10	于士颜		1	0	0.0	0.0