实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转基因成分的数据分析及其标准化研究

• 作者: 卢长明 张丽 曹应龙 梁晓声 王海英
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) 转基因成分 定量检测 标准曲线 数据分析
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 126-134
• 页数: 9页
• 字数: 6371字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.01.014

摘要

在利用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测转基因成分的含量时,数据分析的规范化与标准化对保证实验数据的准确性及实验室间数据的可比性具有重要意义.本研究以转基因玉米(Zea mays)NK603为研究材料,分析了分别以qRT-PCR中3次平行反应的单个Ct值和3次平行反应Ct值的平均值所绘制标准曲线的差异;分析了分别以盲样3次平行反应的Ct平均值和3次平行反应的拷贝数平均值(算术平均值或几何平均值)计算转基因成分含量的差异;并研究了结果准确性判定的方法.结果表明,标准曲线应基于单个Ct值;在计算转基因成分的含量时,Ct值应取算术平均值,拷贝数应取几何平均值;最后通过比较样品的测量结果与标准值之间的差异是否显著(U△＞△m,表明测量结果的平均值与样品的标准值无显著差别)来判断实验结果的可靠性.本研究为转基因产品检测中qRT-PCR实验数据处理的标准化提供了参考资料.