7型庚型肝炎病毒非结构蛋白NS3在大肠埃希菌中的表达、纯化及其反应原性鉴定

• 作者: 冯悦 夏雪山 杨晓钰 赵跃
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 庚型肝炎病毒 NS3蛋白 大肠埃希菌 蛋白表达 反应原性
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 207-212
• 页数: 6页
• 分类号: Q789
• 字数: 4703字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2015.04.005

摘要

目的：研究在大肠埃希菌（ Escherichia coli， E?coli）表达系统中表达和纯化7型庚型肝炎病毒（GB virus C genotype 7， GBV?C G 7）非结构蛋白NS3的149个氨基酸（NS3?149），并对其进行反应原性鉴定。方法将NS3?149基因克隆入原核表达载体pET?28a，并转化入BL21，利用异丙基?B?D?硫代吡喃半乳糖苷（ IPTG）诱导其表达。用Ni2＋柱对融合蛋白NS3?149进行纯化，最后经Western 印迹检测其抗原特异性和反应原性。结果①成功构建了pET?28a?NS3?149重组质粒，该重组质粒转化入BL21后，融合蛋白NS3?149表达的最佳条件为在32℃条件下， A600 nm等于0?8时，用1 mmol／L 的 IPTG 诱导6 h 后，融合蛋白表达量达到最高。经过SDS?PAGE分析，融合蛋白以包涵体的形式表达，其大小约27 kD，与预期大小基本一致；②用感染GBV?C 7型的人阳性血清经Western印迹鉴定，融合蛋白NS3?149具有较好的反应原性，另外，其与GBV?C容易发生共同感染的HIV或HCV阳性血清无非特异性交叉反应，说明了融合蛋白NS3?149具有较好的特异性。结论本实验在大肠埃希菌中表达并纯化并获得具有良好反应原性的GBV?C 7型融合蛋白NS3?149，为进一步对GBV?C进行抗体检测的流行病学调查研究奠定了重要的前期工作基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏雪山	昆明理工大学生命科学与技术学院	79	338	10.0	14.0
2	冯悦	昆明理工大学生命科学与技术学院	30	163	6.0	11.0
3	赵跃	昆明理工大学生命科学与技术学院	5	13	2.0	3.0
4	杨晓钰	昆明理工大学生命科学与技术学院	2	0	0.0	0.0