一步法 SYBR Green 实时定量 RT-PCR检测坦布苏病毒方法的建立

• 作者: 刘宇卓 刘青涛 安凤娇 李银 杨婧 赵冬敏 韩凯凯 黄欣梅
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 坦布苏病毒 实时定量RT-PCR NS2A基因
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医?水产养殖
• 页码范围: 829-833
• 页数: 5页
• 分类号: S855.3
• 字数: 3556字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2015.04.019

摘要

为建立快速检测坦布苏病毒( Tembusu virus,TMUV)的一步法SYBR Green实时定量RT-PCR方法,本研究根据TMUV NS2A基因的保守序列,设计并合成了1对特异性引物,以体外转录的NS2A基因作为标准品,采用一步法实时定量RT-PCR方法检测TMUV。结果显示该方法标准曲线的决定系数为0.997,具有良好的线性关系；灵敏度为1μl 10拷贝,是常规RT-PCR方法的100倍；并且与其他病毒无交叉反应,批内和批间变异系数分别为0.11%~0.30%和0.88%~1.31%,具有良好的特异性和稳定性。该方法对于TMUV人工感染鸭泄殖腔棉拭子的检测阳性率为100%,而常规RT-PCR检测的阳性率只有71%。因此,本研究所建立的一步法实时定量RT-PCR方法灵敏度高、重复性、特异性好,可以用于TMUV的临床检测。