日本血吸虫PDIA3的原核表达和多抗血清制备

• 作者: 冯新港 刘群 李丹丹 段明明 苑纯秀 葛程 马丽贞
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 日本血吸虫 SjPDIA3 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 页码范围: 33-38
• 页数: 6页
• 分类号: S852.735
• 字数: 4039字
• 语种: 中文

摘要

为获得日本血吸虫（Schistosoma japonicum, Sj）PDIA3（SjPDIA3）重组蛋白，并制备多克隆抗体血清，本研究以日本血吸虫cDNA文库为模版，利用PCR技术扩增得到PDIA3 ORF全长，并克隆到pET28a (+)载体中，将得到的重组质粒pET28a-SjPDIA3转化至BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导后His-Ni柱亲和层析纯化得到SjPDIA3重组蛋白，利用重组蛋白免疫BALB/c小鼠，制备多克隆抗体，Western blot分析重组蛋白的免疫原性。扩增得到长为1482 bp日本血吸虫PDIA3的ORF序列，该序列编码493个氨基酸，含两个硫氧还原蛋白结构域和一段信号肽，无扩膜结构。在原核表达系统中表达得到大小为55 kDa的SjPDIA3重组蛋白，分析显示其具有良好的抗原性。