日本血吸虫候选疫苗原肌球蛋白的表达载体构建、原核表达及免疫原性研究

• 作者: 刘锋 崔书建 贺宽耀 陈惠 韩泽广
• 来源期刊: 现代检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 原肌球蛋白 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 15-18
• 分类号: R383.24|R392-33
• 字数: 3475字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2010.02.005

摘要

目的 将日本血吸虫原肌球蛋白基因(tropomyosin)克隆到原核表达载体pET-28a(+)裁体上,在BL-21(DE3)型大肠埃希菌中表达其产物,并对其进行免疫原性分析.方法 从日本血吸虫的Expressed Sequence Tag(EST)文库中筛选出包含tropomyosin全长基因的EST,然后用高保真酶PCR扩增,构建到pET-280(+)裁体上,最终在BL-21(DE3)型大肠埃希菌中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IFTG)诱导表达.表达的his-tropomyosin融合蛋白用镍螯舍树脂蛋白纯化柱(Ni-NTA resin)亲和层析纯化,得到纯度较高的tropomyosin后,通过Western Blotting技术,用感染日本血吸虫的兔血清作为天然抗体来研究tropomyosi的免疫原性.结果 pET-28a(+)-tropomyosin重组质粒在BL-21(DE3)型大肠埃希菌中成功表达,使用SDS-PAGE分析得到实际Mr约为40 000的his-tropomyosin融合蛋白,Ni-NTA resin的纯化效果很明显,获得的相对纯的目的 蛋白经过Western BIotting方法 检潮显示:tropomyosin融合蛋白能够与感染日本血吸虫6 w的兔血清有较强的免疫反应.结论 Tropomyosin能够在BL-21(DE3)型大肠埃希菌中高效表达,且抗原免疫原性强,日本血吸虫感染的兔血清能够识别体外表达的tropomyosin,具有与天然的tropomyosin相同的免疫原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩泽广		48	236	7.0	13.0
2	刘锋		7	25	3.0	5.0
3	贺宽耀	华东理工大学生物工程学院	1	0	0.0	0.0
4	陈惠		1	0	0.0	0.0
5	崔书建		1	0	0.0	0.0