旋毛虫谷氨酸脱羧酶基因的原核表达及其活性研究

• 作者: 周兴东 宋铭忻 师东方 王泽
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 旋毛虫 谷氨酸脱羧酶 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 132-136
• 页数: 5页
• 分类号: S852.731
• 语种: 中文

摘要

采用RT-PCR从旋毛虫中扩增出谷氨酸脱羧酶(TsGAD)基因全长,将其克隆到表达载体pET-30a(+-)后,转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中进行IPTG诱导表达,应用比色法鉴定表达产物(rTsGAD)的酶活性,并用纯化的GAD蛋白制备多克隆抗体.结果显示,成功构建了重组质粒pET-30a(+)-TsGAD,经SDS-PAGE分析,rTsGAD蛋白的分子质量约为57 ku.利用比色法测得粗提的rTsGAD具有酶活性,酶活力为1.5U.制备的多克隆抗体效价较高,可达1∶65 536.Western-blot分析结果显示,该多克隆抗体与TsGAD具有较强的反应性.结果表明,本试验成功原核表达了rTsGAD,并制备了多克隆抗体,为TsGAD定位以及进一步研究旋毛虫谷氨酸依赖型抗酸机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋铭忻		125	372	10.0	11.0
2	师东方		56	299	9.0	14.0
3	王泽		6	9	2.0	3.0
4	周兴东		2	0	0.0	0.0