牛源ISG15蛋白的原核表达及抗血清的制备

• 作者: 廖金虎 张信军 张倩 朱国强 陶洁
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: ISG15 蛋白表达 多抗血清
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 其他
• 页码范围: 68-73
• 页数: 6页
• 分类号: S852.4
• 字数: 4285字
• 语种: 中文

摘要

本研究利用人重组干扰素IFN α-2A刺激牛肾细胞(Mardin-Darby bovine kidney cells,MDBK),并提取细胞总RNA.RT-PCR扩增牛源干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15),将其克隆入pCold-TF表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3).经IPTG诱导表达后,获得约70 kDa可溶性ISG15重组蛋白.用试剂盒对重组蛋白ISG 15进行纯化回收,经BCA法测定其蛋白浓度为1 mg/mL.用纯化的ISG15重组蛋白免疫ICR小鼠,制备多克隆抗体血清,用间接ELISA方法测定多抗血清效价为1∶102 400.利用Western blot进一步鉴定ISG15多抗血清,结果发现其与纯化的ISG15重组蛋白能发生特异性反应,可用于后续研究.