胆汁螺杆菌实时荧光定量 PCR 检测方法的建立

• 作者: 伍妙梨 尹雪琴 朱余军 王静 袁文 郭鹏举 饶丹 黄韧
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胆汁螺杆菌( H.bilis) 荧光定量PCR( qPCR) TaqMan探针
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 59-63
• 页数: 5页
• 分类号: R-332
• 字数: 3758字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969.j.issn.1671.7856.2015.010.014

摘要

目的：建立快速、敏感、特异的胆汁螺杆菌（ Helicobacter bilis，H．bilis） TaqMan 探针实时荧光定量PCR检测方法，对胆汁螺杆菌进行定量检测。方法 PCR扩增H．bilis保守基因P17序列全长ORF435 bp，进行TA克隆，构建质粒标准品pMD-HBP17。通过对pMD-HBP17标准品的定量分析，优化反应体系，检测TaqMan探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性及重复性；用所建立的qPCR方法检测77份临床样品，并与普通PCR的检测结果作比对。结果所建立的qPCR检测方法，质粒DNA浓度在108～101拷贝之间表现出较好的线性和相关性，所得标准曲线的斜率为－3.46，相关系数为0.999，检测灵敏度达到20个拷贝，对77份临床样品的检出率为14.3％，较普通PCR（7.8％）的检出率高。结论建立的H．bilis qPCR检测方法特异性好、敏感性高、稳定性强，可用于胆汁螺杆菌的定量及定性检测。