酸敏感钾通道-3真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

• 作者: 李东亮 李新娟 李超堃 梅懿文 王国红 王琪 魏林郁
• 来源期刊: 中国应用生理学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 真核表达载体 TASK3基因 SH-SY5Y细胞 克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 211-215
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4554字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13459/j.cnki.cjap.2015.03.005

摘要

目的:构建酸敏感钾通道-3(TASK3)的真核表达载体,通过转染SH-SY5Y细胞建立稳定表达的细胞株.方法:将TASK3亚克隆至pEGFP-N1质粒上,构建重组质粒pEGFP-TASK3,利用X-fect试剂盒将其转染至SH-SY5Y细胞中,通过G418辅助荧光筛选建立稳定表达TASK3-eGFP的细胞株;Western blot和激光共聚焦检测TASK3-eGFP的表达及细胞内定位;不同pH值(7.0、6.7、6.4、6.1)作用稳定表达细胞株24h后,CCK-8检查细胞活力.结果:重组真核表达载体构建正确,获得了TASK3-eGFP稳定表达细胞株.不同pH值作用野生型和稳定表达细胞株24h后,两组细胞的存活率随着pH值降低而显著降低(P＜0.05).相同pH值下(除pH 7.0),稳定表达细胞存活率较野生型细胞显著升高(P＜0.05).结论:成功构建pEGFP-TASK3真核表达载体,建立了稳定表达TASK3-eGFP的SH-SY5Y细胞株,该细胞可为研究TASK3的功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李东亮	新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学研究室	130	669	13.0	18.0
2	魏林郁	新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学研究室	26	119	7.0	9.0
3	王国红	新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学研究室	20	80	5.0	8.0
4	李新娟	新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学研究室	26	130	5.0	9.0
5	王琪	新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学研究室	2	3	1.0	1.0
6	梅懿文	郑州大学第一附属医院消化实验室	2	1	1.0	1.0