基于 Avi-tag技术的双生物素分子位点专一性标记的增强型绿色荧光蛋白

• 作者: 包雪翠 唐海科 唐金宝 杨洪鸣 赵爽佳 鲍如梦
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 增强型绿色荧光蛋白 生物素化 Avi-tag BirA酶
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 655-658
• 页数: 4页
• 分类号: Q591.2
• 字数: 2805字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2015.05.016

摘要

目的：利用Avi-tag技术制备双生物素分子位点专一性标记的增强型绿色荧光蛋白（ EGFP）。方法：PCR方式扩增EGFP基因片段，重组至带有双Avi-tag标签的中间质粒载体 pdi-Avitag，构建原核表达载体pEGFP-（Avitag）2并转化E.coli DH5α；表达菌株菌体冻融上清经金属离子亲和色谱纯化目的蛋白EGFP-（ Avitag）2，以BirA酶体外催化生物素分子与目的蛋白在Avi-tag位点的生物连接，并以 Western blot和竞争ELISA鉴定生物素化产物EGFP-B2的生物素化效果。结果：成功构建pEGFP-（Avitag）2载体，并在E.coli DH5α中可溶性表达EGFP-（Avitag）2，经Western blot和竞争ELISA鉴定， EGFP-（ Avitag）2分子经BirA酶体外催化可连接两个生物素分子。结论：成功获得双生物素分子位点专一性标记的增强型绿色荧光蛋白，为其在BAS体系中的应用奠定了研究基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	包雪翠	潍坊医学院药学院	2	3	1.0	1.0
2	赵爽佳	潍坊医学院药学院	4	3	1.0	1.0
3	唐金宝	潍坊医学院药学院	17	48	5.0	6.0
4	鲍如梦	潍坊医学院药学院	3	1	1.0	1.0
5	唐海科	潍坊医学院药学院	2	1	1.0	1.0
6	杨洪鸣	潍坊医学院药学院	9	20	2.0	4.0