慢病毒构建表达人β-防御素3的滑膜间质干细胞及其抑菌活性鉴定

• 作者: 丁喆如 丛锐军 吴宇黎 吴海山 殷杏 符培亮
• 来源期刊: 中华骨科杂志
• 关键词: 防御素类 滑膜 间质干细胞 慢病毒属
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1168-1176
• 页数: 9页
• 字数: 7561字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2352.2015.11.014

摘要

目的 检测利用慢病毒介导人β-防御素3 (humanβ-defensin 3,hβD-3)基因转染人滑膜间质干细胞(synovium-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)的安全性及体外抗菌活性.方法 通过膝关节镜手术获取人膝关节交叉韧带及滑膜组织以分离、培养SMSCs,贴块法培养并用磁珠分选仪纯化,通过显微镜观察、免疫荧光鉴定和细胞表面标记对细胞进行鉴定.通过成脂、成骨和成软骨分化诱导分别对细胞多向分化潜能进行测定.利用质粒构建包含hβD-3基因的慢病毒载体并转染SMSCs,绘制细胞生长曲线,采用流式细胞仪确定其DNA含量,使用NOD/SCID小鼠验证其致瘤性.使用琼脂扩散法对转染后的SMSCs进行抑菌活性检测,同时用兔膝关节内金黄色葡萄球菌感染模型验证其体内抑菌作用.结果 贴块法获得的SMSCs经分离纯化后表现出间质干细胞应有的结构和表面标志物,具有多向分化潜能.免疫荧光证实被慢病毒转染的SMSCs能稳定表达hβD-3蛋白.增殖动力学、核型分析、致瘤型分析等证实转染后的SMSCs安全.重组细胞体外和动物模型体内抑菌活性检测显示,传代后的SMSCs(采用P5代细胞)能稳定表达hβD-3并具有抗菌活性.与阴性、阳性对照组比较,低浓度组有一定的抑菌活性,并且随浓度增高,抑菌圈逐渐增大.结论 经重组慢病毒载体感染的人SMSCs能安全稳定地传代并表达hβD-3,体外具有明显的抗菌活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴海山	第二军医大学附属长征医院关节外科	108	983	17.0	25.0
2	吴宇黎	第二军医大学附属长征医院关节外科	46	411	13.0	18.0
3	丛锐军	同济大学附属上海第十人民医院骨科	8	32	3.0	5.0
4	符培亮	第二军医大学附属长征医院关节外科	25	123	8.0	10.0
5	丁喆如	第二军医大学附属长征医院关节外科	8	37	3.0	6.0
6	殷杏	第二军医大学附属长征医院实验诊断科	6	13	2.0	3.0