链霉菌769胆固醇氧化酶基因克隆、表达及生物学活性分析

• 作者: 佟雨航 张正坤 徐文静 李启云 杜茜 谭笑 路杨
• 来源期刊: 中国生物防治学报
• 学科: 农学
• 关键词: 胆固醇氧化酶 克隆 表达 活性分析
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 889-896
• 分类号: S476.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.16409/j.cnki.2095-039x.2015.06.011

摘要

胆固醇氧化酶(cholesterol oxidase,EC 1.1.3.6)是胆固醇降解代谢过程中的关键酶,在食品开发、医疗保健、临床检测、生物农药等方面具有广泛的应用价值.通过PCR方法从链霉菌Streptomyces ahygroscopicus 769的基因组中扩增得到769 ChOA基因(GenBank accession No.KF290994).该基因全长为1578bp,编码一个由525 aa组成的蛋白质,蛋白理论分子量为57 kDa,等电点为6.29.769_ ChOA与来源于S.natalensis的胆固醇氧化酶基因的同源性为91％.构建了硫氧还蛋白-769_ChOA融合的表达载体pET32a::769_ChOA,以Escherichia coli Origami B(DE3)为表达宿主,获得了能可溶性表达的胆固醇氧化酶重组菌.经Ni亲和层析纯化得到的酶蛋白比活力为5.90 U/mg.酶学性质分析表明,该酶对胆固醇的催化活性最高,对测定的7种胆固醇类似物也都具有一定的催化能力.酶的最适温度和pH范围为20～40℃和pH 6.0～8.5,其活性均高于80％,且在30℃和pH 7.0时表现出最大的活性,酶活分别达到6.83和6.44 U/mg.酶在低于40℃和弱碱性条件下具有很好的稳定性.该酶对鳞翅目害虫亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis (Guenée)和水稻二化螟Chilo suppressalis(Walker)幼虫具有很强的杀虫活性,半致死浓度分别为27.4和17.1 μg/mL.