结核分枝杆菌rv3295基因的原核表达及单克隆抗体的制备

• 作者: 于申业 党光辉 刘思国 宋宁宁 崔莹莹 曹俊 李华芳
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 结核分枝杆菌 rv3295基因 原核表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 172-176
• 页数: 5页
• 分类号: S852.618
• 语种: 中文

摘要

以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增了rv3295基因;将其克隆至表达载体pET-22b中,构建了重组质粒pET-22b-Rv3295;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中,经IPTG诱导表达出了Rv3295蛋白.通过亲和层析纯化,以该重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合筛选制备抗该重组蛋白的单克隆抗体;采用Western-blot验证单克隆抗体的特异性;通过亚型鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型.结果显示,Rv3295蛋白以可溶形式表达,蛋白质的分子质量大小为25 ku.获得1株抗该重组蛋白的单克隆抗体1F7,其亚型为IgG1/κ;Western-blot结果显示,该抗体具有较好的特异性.本研究制备的Rv3295蛋白的单克隆抗体对于研究Rv3295蛋白的功能及其与DNA之间的互作奠定了基础.