杜氏盐藻环盒子1相互作用蛋白的酵母双杂交法筛选

• 作者: 关方霞 张彦婷 张楠楠 朱相展 李庆华 杨露 薛乐勋 许尧
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 酵母双杂交 杜氏盐藻 诱饵载体 自激活 环盒子1
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 326-331
• 页数: 6页
• 分类号: Q782
• 字数: 4549字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13705/j.issn.1671-6825.2015.03.005

摘要

目的:构建杜氏盐藻环盒子1(RBX1)的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-RBX1,筛选与RBX1相互作用的蛋白.方法:采用PCR技术扩增杜氏盐藻RBX1的开放阅读框,测序分析后插入酵母表达质粒,构建诱饵载体pG-BKT7-RBX1.将酶切鉴定正确的诱饵载体用PEG/LiAc法分别转化到酵母菌Y187和AH109中,通过表型筛选检测RBX1对酵母菌有无自激活和毒性作用.转化诱饵质粒的Y187与文库菌AH109杂交,待三叶草形状的合子形成后用营养缺陷型培养基和α-半乳糖苷酶活性实验筛选阳性克隆并测序.结果:成功构建了pGBKT7-RBX1,它对Y187和AH109两种酵母菌既无自激活又无毒性作用.杂交后筛选得到两个阳性克隆,阳性克隆1与莱茵衣藻和拟南芥中氧化还原酶铁硫蛋白亚基的同源性为38％和39％,阳性克隆2与莱茵衣藻中转化抑制剂蛋白的同源性为57％.结论:诱饵载体pGBKT7-RBX1可用于酵母双杂交.成功筛选得到两个阳性克隆,可能是与RBX1相互作用的蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛乐勋	郑州大学生命科学学院	140	1187	18.0	26.0
2	关方霞	郑州大学生命科学学院	64	248	9.0	12.0
6	杨露	郑州大学生命科学学院	11	56	4.0	7.0
7	张楠楠		12	42	4.0	6.0
8	李庆华	郑州大学生命科学学院	20	74	6.0	7.0
9	朱相展	郑州大学生命科学学院	8	29	4.0	5.0
10	张彦婷	郑州大学生命科学学院	17	42	4.0	5.0
11	许尧	郑州大学生命科学学院	4	16	2.0	4.0