利用定向进化技术提高米黑霉脂肪酶活性及基因突变位点分析

• 作者: 王珏 胡丽丽
• 来源期刊: 山西中医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 脂肪酶 定向进化 基因突变 蛋白结构
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 临床研究与经验
• 页码范围: 46-48
• 页数: 3页
• 分类号: R318
• 字数: 2303字
• 语种: 中文

摘要

目的:获得催化油脂活性明显提高的米黑霉脂肪酶(Rhizomucor miehei Lipase,RML)突变体.方法:选取大肠杆菌表达体系,利用定向进化技术,进行四轮易错PCR. 结果:得到5个活性明显提高的酶突变体,其中突变体M5催化油脂活性可达(3 241±100)U/mg,而野生型脂肪酶活性为(253±30)U/mg,活性提高12倍. 结论:结合RML成熟蛋白结构,对M5基因成熟区的5个突变位点Ser168、Ser173、phe240、Thr311、Asp313进行分析, 发现Ser168、Ser173位于蛋白结构中覆盖活性中心的"盖子"结构附近,而phe240、Thr311、Asp313则分布在目标蛋白活性中心上下游的位置. 据此,研究为RML基因的进一步改造提供重要的突变位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王珏	山西中医学院基础医学院	10	2	1.0	1.0
2	胡丽丽	山西中医学院基础医学院	13	5	1.0	1.0