雏番鸭细小病毒vp3基因的原核表达及增殖病毒的检测

• 作者: 于瑞嵩 张源淑 朱于敏 李震 董世娟 黄瑜
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: MDPV vp3基因 原核表达 纯化 免疫荧光分析
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 动物及兽医生物技术
• 页码范围: 65-74
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.140150

摘要

近年来,番鸭细小病毒出现新的流行趋势,估计与病毒基因变异有关,因此针对新流行毒株研发新的检测方法很有必要.本研究根据番鸭细小病毒(MDPV) 2012年分离株SAAS-SHNH的全基因序列,设计了一对特异性引物,利用PCR技术扩增全长vp3基因,经鉴定正确后,进行同源性比对分析,同时将其克隆到PET28a载体,构建成PET28a-VP3原核表达载体,经转化及IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳和Western blotting分析,表达出与预期大小相符的63.1 kDa的蛋白,该蛋白可与临床采集的免疫过MDPV的番鸭血清结合,说明该蛋白可用于MDPV的血清学检测.将纯化后蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔源MDPV-VP3蛋白的多克隆抗体,制备的兔源血清能够与MDPV疫苗弱毒株及J3D6株VP3蛋白发生特异结合;MDPV感染原代鸭胚成纤维细胞(DEF)后,利用兔源血清作为一抗进行免疫荧光分析(IFA)分析,在DEF细胞核和细胞质内均能检测到VP3蛋白,表明利用VP3蛋白制备的抗血清可以用于MDPV免疫荧光分析细胞增殖病毒的检测.这为今后MDPV的快速检测提供了技术基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于瑞嵩	上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室	25	126	7.0	9.0
2	朱于敏	上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室	11	46	4.0	5.0
3	张源淑	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	99	589	13.0	18.0
4	董世娟	上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室	12	42	4.0	5.0
5	黄瑜	南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室	2	11	2.0	2.0