新型鸭细小病毒VP3基因克隆与原核表达

• 作者: 侯绍华 孙继国 崔元 李晓轩 王建昌 王金凤 经美 袁万哲 陈萍
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭细小病毒 VP3 原核表达
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 20-23
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 字数: 2974字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2018.06.005

摘要

应用PCR方法扩增新型鸭细小病毒(NDPV )VP3基因,将其克隆至原核表达载体pQE1中,获得重组质粒pQE1-VP3 .重组质粒pQE1-VP3经优化诱导表达后,通过SDS-PAGE对表达产物进行分析并利用His标签抗体对表达的蛋白进行Western blot鉴定.结果表明,NDPV VP3蛋白在25℃、IPTG浓度为1 .0 mmol/L经诱导5 h ,可获得最大诱导表达量,表达蛋白的分子质量约为60 ku ,主要以不溶性包涵体形式存在.纯化复性后,可获得浓度为5 .165 mg/mL 及纯度为97% 的VP3蛋白.获得的重组菌pQE1-VP3以及高纯度的VP3蛋白,为进一步研究NDPV检测方法和新型疫苗奠定了基础.