类猪圆环病毒 P1 VP1蛋白在昆虫细胞中的表达及特性分析

• 作者: 何孔旺 姚火春 温立斌 王凤芝 王小敏
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: P1 VP1 昆虫杆状病毒表达载体系统 RT-PCR Western Blot 电镜
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 页码范围: 90-94
• 页数: 5页
• 分类号: S432.4
• 字数: 3689字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2015.04.016

摘要

为了鉴定类猪圆环病毒 P1 VP1蛋白能否在体外自组装成病毒样颗粒（VLPs），首先 PCR 扩增 P1 ORF1基因，利用 pFastBac TM1载体构建重组质粒，通过脂质体转染在 Sf9细胞中表达 P1 ORF1基因。然后通过 RT-PCR 技术及 Western Blot 分别从转录和蛋白质水平上鉴定该基因的表达，应用透射电镜观察该蛋白质是否形成了 VLPs。结果显示，转染 Sf9细胞后，第5天开始出现细胞病变；从接毒细胞中提取总 RNA，经 Recombinant DNaseⅠ处理除去基因组DNA 后，RT-PCR 能够扩增出362 bp 的目的片段；收获接毒后72 h 的细胞，Western Blot 分析显示，P1 ORF1重组病毒样品能够与抗 P1 VP1单抗发生特异性反应；电镜观察发现，该蛋白在 Sf9细胞中形成了近椭圆形的包涵体。利用杆状病毒表达载体系统成功地在 Sf9细胞中表达了类猪圆环病毒 P1的 ORF1基因，并证实在本试验条件下 P1 VP1蛋白不能自组装成 VLPs，为进一步研究 P1 VP1蛋白的免疫学特性奠定基础。