单抗制品中CHO细胞宿主蛋白残留双抗夹心ELISA检测方法的建立

• 作者: 周冬梅 孙文正 徐军 杨彬 柯志 苏彦景
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CHO细胞 宿主蛋白 双抗夹心酶联免疫吸附法
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 837-840
• 分类号: R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 建立单抗制品中CHO细胞宿主蛋白(host cell protein,HCP)残留双抗夹心ELISA检测方法.方法 确定双抗夹心ELISA方法的最佳工作条件,并对该方法的精密度和准确度进行验证,确定线性范围及最低检出限;用建立的方法与市售试剂盒分别检测低、中、高浓度HCP标准品及抗TNF-ct单抗原液、抗VEGF单抗纯化工艺样品中的HCP.结果 建立的双抗夹心ELISA法最佳抗体包被浓度为1.5μg/ml,酶标抗体浓度为1μg/ml,160 r/min,37℃孵育2.5h;TMB 37℃孵育15 min;以630 nm为参比波长,450 nm为测定波长.该方法的线性范围为3.125 ～100 ng/ml,最低检测限为3.125 ng/ml;试验内变异系数(CV)和试验间cv均小于15％,回收率为85.3％ ～ 115.1％.与商品化试剂盒检测结果基本一致,可用于检测纯化工艺样品.结论 已成功建立单抗制品中CHO细胞HCP残留双抗夹心ELISA检测方法,该方法可代替市售试剂盒用于CHO细胞HCP残留检测,可使检测成本降低30倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周冬梅		9	12	2.0	3.0
2	徐军		9	12	2.0	3.0
3	孙文正		15	27	3.0	4.0
4	杨彬		16	28	3.0	4.0
5	柯志		2	4	1.0	2.0
6	苏彦景		1	4	1.0	1.0